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免疫標記電鏡技術
(1)原理:是利用電鏡下可見的示蹤標記物標記特異性抗體(或抗原),使之與組織超薄切片中的相應抗原(或抗體)反應,形成不溶性免疫復合物,用電鏡觀察可見的標記物,間接證實免疫反應的發生。
(2)常用的免疫標記電鏡技術:
、勹F蛋白標記免疫電鏡技術:抗體與鐵蛋白通過低分子量的雙功能試劑結合為一種雙分子復合物。
②酶標記免疫電鏡技術:是以酶作為抗原抗體反應的標記物,與相應的酶底物作用,形成一種不溶性的反應產物。包括酶標記抗體法、非標記抗體酶法和非標記的過氧化物酶-抗過氧化物酶技術(即PAP法)。
、勰z體金標記免疫電鏡技術:是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質,使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時,在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色,不需外加染色。
免疫球蛋白的概述
(1)免疫球蛋白(Ig)掌握:是由漿細胞產生,存在于血液和體液(包括組織液和外分泌液)中,也可作為抗原受體表達于B細胞表面。多數Ig具有抗體活性,可以特異性識別和結合抗原?贵w是機體在抗原刺激下,由漿細胞合成分泌產生的具有與相應抗原發生特異性結合的球蛋白,即具有免疫功能的球蛋白。所有的抗體均是免疫球蛋白,但并非所有免疫球蛋白都是抗體。
(2)化學結構①Ig的基本結構:Ig分子由4條肽鏈借鏈間二硫鍵連接組成,即2條相同的重鏈(H)和2條相同的輕鏈(L)和幾對二硫鍵連接成一個基本單位,稱為單體。IgG、IgE.IgD及多數血清型IgA皆為單體,分泌型IgA為雙體,IgM為五聚體。
②功能區:Ig分子的H鏈與L鏈各區段可通過鏈內二硫鍵折疊成彼此相似球狀結構,擔負特定免疫學功能,稱為功能區。L鏈有兩個功能區,稱為VL、CL.③Ig的水解片段:Ig分子可被許多蛋白酶水解,產生不同的片段。
(3)免疫球蛋白的血清型①同種型;②同種異型;③獨特型:抗原決定簇可在異種、同種異體以及自體內誘導產生相對應的抗體,稱為抗獨特型抗體。獨特型和抗獨特型抗體將整個抗體組成一個網絡,稱獨特型網絡。
(4)免疫球蛋白的生物學活性抗體是具有雙功能分子,它既可特異性結合抗原,又可獨立誘發或執行一系列生物學效應,由抗體分子不同部位分別執行。①與抗原結合作用;②補體活化作用;③親細胞作用;④調理作用;⑤膜傳遞作用。
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