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　　雙向擴(kuò)散試驗

　　雙向擴(kuò)散試驗是讓抗原和抗體雙方都在瓊脂中各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在比例恰當(dāng)之處形成抗原抗體沉淀線，觀察這種沉淀線的位置、形狀以及對比關(guān)系，可對抗原或抗體進(jìn)行定性分析。根據(jù)試驗形式也可分為試管法和平板法兩種。

　　(一)試管法

　　(二)平板法

　　是鑒定抗原抗體的最基本、最常見的方法之一。根據(jù)沉淀線的有無、形態(tài)和位置可作如下分析：

　　1.抗原或抗體的存在與否以及相對含量的估計　沉淀線的形成是根據(jù)抗原抗體兩者比例所致，沉淀線如果靠近抗原孔，則表示抗體含量較大;沉淀線如果靠近抗體孔，則表示抗原含量較大;不出現(xiàn)沉淀線則表明無對應(yīng)的抗體或抗原或者抗原過量。

　　2.抗原或抗體相對分子量的分析　抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量的影響。分子量小者擴(kuò)散快，反之則較慢。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度則較大，形成的沉淀線彎向分子量大的一方;如果兩者分子量大致相等，則形成直線。

　　3.抗原性質(zhì)的分析　兩種受檢抗原的性質(zhì)可完全相同、部分相同或完全不同。三種情況在雙向擴(kuò)散試驗中表現(xiàn)如下：兩條沉淀線互相吻合相連，表明抗體與兩個抗原中的相同表位結(jié)合而沉淀，兩個抗原相同;沉淀線呈部分相切，說明兩個抗原之間有部分相同;兩條沉淀線交叉而過，說明兩個抗原完全不同。

　　4.抗體效價的滴定　雙向擴(kuò)散試驗是抗血清抗體效價滴定的常規(guī)方法。固定抗原的濃度，稀釋抗體;或者抗原和抗體雙方皆作不同的稀釋，經(jīng)過自由擴(kuò)散，形成沉淀線，以出現(xiàn)沉淀線最高的抗體稀釋度為該抗體的效價。

　　5.抗原或抗體純度鑒定　用混合抗原或抗體鑒定抗體或抗原，出現(xiàn)一條沉淀線說明待測抗原或抗體純，出現(xiàn)多條沉淀線說明不純。

　　雙向擴(kuò)散試驗簡單易行，用途廣泛，但該技術(shù)靈敏度低，出現(xiàn)結(jié)果慢，不能精確定量，這些弱點在相當(dāng)程度上限制了它的應(yīng)用。

　　練習(xí)題：

　　1.關(guān)于雙向擴(kuò)散試驗下列錯誤的是

　　A.平板法是鑒定抗原抗體的最基本、最常見的方法之一

　　B.不出現(xiàn)沉淀線則表明無對應(yīng)的抗體或抗原或者抗原過量

　　C.抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量的影響

　　D.雙向擴(kuò)散試驗是抗血清抗體效價滴定的常規(guī)方法

　　E.雙向擴(kuò)散試驗簡單易行，用途廣泛，該技術(shù)靈敏度高，出現(xiàn)結(jié)果快，能精確定量

　　【答案及解析】E。雙向擴(kuò)散試驗簡單易行，用途廣泛，但該技術(shù)靈敏度低，出現(xiàn)結(jié)果慢，不能精確定量，這些弱點在相當(dāng)程度上限制了它的應(yīng)用。

　　2.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗中，若抗原抗體含量相同，但抗原的分子量比抗體大，則沉淀線應(yīng)為

　　A.靠近抗原孔，且弧線彎向抗原側(cè)

　　B.靠近抗原孔，且弧線彎向抗體側(cè)

　　C.靠近抗體孔，且弧線彎向抗原側(cè)

　　D.靠近抗體孔，且弧線彎向抗體側(cè)

　　E.居于抗原孔和抗體孔中間，且弧線彎向抗原側(cè)

　　【答案及解析】E。沉淀反應(yīng)中，沉淀線靠近抗原孔，提示抗體含量大;靠近抗體孔，提示抗原含量多。抗原抗體在瓊脂內(nèi)擴(kuò)散速度受分子量的影響，分子量小的擴(kuò)散快。由于速度慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度大，形成的沉淀線彎向分子量大的一方。

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