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熒光抗體技術(shù)

　　(1)熒光抗體的制備和鑒定：

　　①抗體熒光素標記：用于標記抗體，要求是高特異性和高親和力的。作為標記的熒光素應符合以下要求：

　　1)應具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價鍵的化學基團，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。

　　2)熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率。

　　3)熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明。

　　4)與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)。

　　5)標記方法簡單、安全無毒。

　　6)與蛋白質(zhì)的結(jié)合穩(wěn)定，易于保存。常用的標記蛋白質(zhì)的方法有攪拌法和透析法兩種。

　　②熒光抗體的鑒定：包括效價及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率。抗體效價可以用瓊脂雙擴散法進行滴定，效價大于1：16者較為理想。熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率(F/P)來計算。F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。一般用于固定標本的熒光抗體以F/P=1.5為宜，用于活細胞染色的以F/P=2.4為宜。

　　(2)免疫熒光顯微技術(shù)：是使熒光抗體與標本切片中組織或細胞表面的抗原進行反應，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。

　　①標本的制作：主要靠觀察切片標本上熒光抗體的染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位。

　　②熒光抗體染色：滴加經(jīng)適當稀釋的熒光抗體進行染色。

　　③熒光顯微鏡檢查：最好在染色當天即作鏡檢，以防熒光消退，影響結(jié)果。

　　④實驗的類型：包括直接法、間接法、補體結(jié)合法和雙標記法。

免疫效應分子

　　在免疫細胞針對抗原(特別是細胞性抗原)行使免疫效應功能時，細胞因子是其中重要效應分子之一。例如TNFα和TNFβ可直接造成腫瘤細胞的凋零(apoptosis)，使瘤細胞DNA斷裂，細胞萎縮死亡;干擾素α、β、γ可干擾各種病毒在細胞內(nèi)的復制，從而防止病毒擴散;LIF可直接作用于某些髓性白血病細胞，使其分化為單核細胞，喪失惡性增殖特性。另有一些細胞因子通過激活效應細胞而發(fā)揮其功能，如IL-2和IL-12刺激NK細胞與TC細胞的殺腫瘤細胞活性。與抗體和補體等其它免疫效應分子相比，細胞因子的免疫效應功能，因而在抗腫瘤、抗細胞內(nèi)寄生感染、移植排斥等功能中起重要作用。

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