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游離脂肪酸測定

　　臨床上將C10以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸(FFA)。正常血清中含有油酸(C18：1)占54%，軟脂酸(C16：1)占34%，硬脂酸(C18：1)占6%，是其主要的FFA.另外還有月桂酸(C12：0)、肉豆蔻酸(C14：0)和花生四烯酸(C20：1)等含量很少的脂肪酸。與其他脂質(zhì)比較，F(xiàn)FA在血中濃度很低，其含量水平極易受脂代謝、糖代謝和內(nèi)分泌功能等因素影響，血中FFA半壽期為1-2min，極短。血清中的FFA是與清蛋白結(jié)合進行運輸，屬于一種極簡單的脂蛋白。

　　測定血清FFA法有滴定法、比色法、原子分光光度法、高效液相層極法和酶法等。一般多以酶法測定。作FFA測定的標(biāo)本一定要注意在4℃條件下分離血清并進行測定。因為血中有各種脂肪酶存在，極易也極快速使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中FFA值上升。貯存的標(biāo)本僅限于24h內(nèi)，若保存三天，其值約升高30%，使結(jié)果不準(zhǔn)確。

　　⒈非酶法確定非酶法測定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相層析法。前三種方法準(zhǔn)確性差，高效液相層析法儀器太昂貴，不便于批量操作。

　　⒉酶測定法血清中主要用脂肪酶測定。可分別測定產(chǎn)物乙酰CoA、AMP或輔酶A(CoA)，進行定量。酶法測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠快速，易于批量檢測。

免疫擴散法

　　先制備含Apo抗體的瓊脂糖凝膠，間隔等距離打孔，加入待測人血清，水平置于溫箱(37℃)保溫24或48h，抗原從孔中間向周圍擴散，因凝膠板中有相應(yīng)抗體，經(jīng)一定時間擴散后，最后在凝膠孔周圍形成一圓型沉淀圈，測量其圓直徑，以圓的面積大小計算血清中Apo含量。該法要求在測量圓周大小時，一定要精確到0.1mm.這一測定方法可適用于以抗體為試劑販所有微量蛋白的測定，但易受多種因素的影響，難以測準(zhǔn)，有淘汰的趨勢。

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