第六章 色譜法

　　l 色譜法：是一種物理或物理化學分離分析方法，將混合物中各組分分離后在線或離線分析的方法。是分析混合物的最有效的手段。

　　l 應用范圍：定性鑒別、純度檢查、含量測定。

　　§1. 概論

　　★★一、基本原理

　　色譜過程是物質分子在相對運動的兩相(固定相和流動相)間分配平衡的過程，可用分配系數(K )和容量因子(k)來描述。

　　混合物中，若兩組分的 K或 k不等，則被流動相攜帶的速度不等，產生差速遷移，從而被分離。

　　1. 分配系數K：組分在固定相和流動相之間達到分配平衡時的濃度之比。

　　K = Cs/Cm

　　K：與組分自身特性、固定相、流動相的性質及溫度有關

　　2. 容量因子k (質量分配系數)：達分配平衡后，組分在固定相和流動相中的質量之比。

　　k = Ws/Wm

　　k與K的關系： k = Cs·Vs/(Cm·Vm )= K(Vs/Vm)

　　k: 與組分、固定相、流動相的性質及溫度有關;還與兩相體積有關。

　　不同組分之間的 k 差異是色譜分離的先決條件

　　3. 色譜過程方程 tR=t0(1+K·VS/Vm)=t0(1+k)

　　二、分類：

　　《中國藥典》將色譜法分為紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、電泳法

　　1. 按分離原理分類：

　　吸附色譜法：固定相為固體(吸附劑) 如GSC、LSC

　　分配色譜法：固定相為液體 如GLC、LLC

　　離子交換色譜法：固定相為離子交換樹脂，適用于離子型的有機物或無機物的分離分析

　　分子排阻色譜法(空間排組色譜法、凝膠色譜法)：固定相為多孔性填料(凝膠)

　　2. 按操作形式分類：柱色譜法、平面色譜法、電泳法

　　§2. 薄層色譜法 thin layer chromatography TLC

　　一、基本原理：

　　分離依據：難被吸附化合物移動快，易被吸附化合物移動慢些，產生差速遷移®KA≠KB®分離

　　二、常用固定相

　　吸附TLC法的固定相為吸附劑，最常用硅膠，其次有硅藻土、氧化鋁、微晶纖維素、聚酰胺。

　　1. 硅膠：SiO2·xH2O， 具有硅氧交聯結構、表面有許多硅醇基的多孔性微粒。硅醇基是活性基團。含水量↑，活性↓。

　　活化：105℃ ~ 110℃加熱30 min，吸附力增強。

　　TLC常用硅膠G、硅膠GF254、硅膠H和硅膠HF254。

　　2. 氧化鋁：有堿性、中性和酸性三種

　　3. 聚酰胺：表面有酰胺基，與酚、羧酸、氨基酸等形成氫鍵

　　三、操作方法 薄層板的制備：涂布厚度0.2～0.3 mm。

　　點樣與展開：點樣的樣點一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑為2～4mm。

　　一塊板可以點多個樣點，展開時，薄層板浸入展開劑的深度為距薄層底邊0.5～1.0cm