文章責編:linsen_1989
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(一)病毒分離
病人急性期血液、尸檢組織或感染動物的肺、腎等組織均可用于病毒分離,組織需研磨成懸液。常用Vero-E6細胞分離培養,培養7~14天后,用免疫熒光染色法檢查細胞內是否有病毒抗原,胞漿內出現黃綠色顆粒熒光為陽性。也可取檢材接種易感動物來分離病毒,常用者為小白鼠乳鼠,通過腹腔或腦內接種,接種后逐日觀察動物有無發病或死亡,并定期取動物腦、肺等組織,冰凍切片或將組織研磨成懸液后分別用免疫熒光法或ELISA檢查是否有病毒抗原。用細胞或動物分離培養陰性者繼續盲傳,連續三代陰性者方能肯定為陽性。此外在進行動物實驗時采取嚴格的隔離及防護措施,以防止發生實驗室感染。
(二)血清學檢查
1.檢測特異性lgM 抗體:此抗體在發病后第1~2天即可檢出,急性期陽性率可達95%以上,因此檢測此抗體具有早期診斷價值。根據情況可選用間接免疫熒光法(IFAT)和ELISA,后者又可分為lgM捕捉法和間接法,其中以lgM捕捉法的敏感性和特異性為最好。
2.檢測特異性lgG抗體:病后特異性lgg 抗體出現較早,維持時間很長,因此需檢測雙份血清(間隔至少一周),恢復期血清抗體滴度比急性期升高4倍以上可確診。常用檢測方法為IFAT和ELISA。此兩種方法還可用于血清流行病學調查。
3.檢測血凝抑制抗體:采用血凝抑制試驗檢測病人血清中的特異性血凝抑制抗體,在輔助診斷和流行病學調查中也較常用。
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