散射比濁法和透射比濁法由于測定方法簡便、快速而被廣泛使用。許多試劑盒供應(yīng)抗血清及標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),即可建立此測定法。此技術(shù)可以測定抗原-抗體復(fù)合物(沉淀顆粒)形成的量(終點法),亦可采用測定復(fù)合物形成的速率(動力學(xué)方法,即通過散射濁度計測定抗原-抗體混合反應(yīng)復(fù)合物顆粒形成的時間,即反應(yīng)速率。一定條件下,反應(yīng)速率與反應(yīng)體系中抗原的含量直線相關(guān),可以通過制備標(biāo)準(zhǔn)曲線而計算)。
現(xiàn)已有設(shè)計完善的帶微電腦進行數(shù)據(jù)處理的散射濁度計和透射濁度計,以免疫化學(xué)系統(tǒng)(immuno-chemicalsystem,ICs )可供應(yīng)。免疫擴散法不需昂貴設(shè)備,放射免疫法則需要液體閃爍計數(shù)器及應(yīng)用放射性同位素。
現(xiàn)將幾種常用的免疫化學(xué)測定法的特點列表總結(jié)比較于表2-9、10中。
表2-9 電泳與免疫化學(xué)檢測血清蛋白列表比較
電泳法(CAM法) | 各種免疫化學(xué)分析法 |
前白蛋白 | 前白蛋白 |
白蛋白 | 白蛋白 |
α1球蛋白(區(qū)帶) | α1抗胰蛋白酶 |
α1酸性糖蛋白 | |
α1脂球蛋白 | |
α1脂蛋白 | |
甲狀腺激素結(jié)合球蛋白,皮質(zhì)醇結(jié)合蛋白 | |
α2球蛋白(區(qū)帶) | 結(jié)合珠蛋白 |
α2巨球蛋白 | |
銅藍(lán)蛋白 | |
前β脂蛋白 | |
β球蛋白(區(qū)帶) | 轉(zhuǎn)鐵蛋白 |
血紅素結(jié)合蛋白 | |
補體C4,C3 | |
β2微球蛋白 | |
γ球蛋白(區(qū)帶) | IgG,A,M,D,E |
C反應(yīng)球蛋白 |
表2-10 幾種免疫化學(xué)測定方法的比較
靈敏度 | 準(zhǔn)確性 | 檢測時間 |
散射比濁法 10mg/L | 批內(nèi)CV值<5% | 幾分鐘(動力學(xué)法) |
1小時 (終點法) | ||
透射比濁法 20-30mg/L | 批內(nèi)CV值5%-10% | 1小時內(nèi) |
免疫擴散法 >20mg/L | 批間CV值5%-15% | 1-2天 |
放射免疫法 μg/L | 批內(nèi)CV值5%-10% | 幾小時 |
關(guān)于免疫化學(xué)測定方法中的標(biāo)準(zhǔn)品和方法的標(biāo)準(zhǔn)化問題:含有準(zhǔn)確含量的純抗原蛋白不易買到。制備的抗血清由于其來源不同,其特異性和靈敏度效價有很大差異,一個純蛋白制劑來制備高特異性的抗血清亦非輕易之舉。因此抗血清的制備和方法的標(biāo)準(zhǔn)化是方法推廣和使用的關(guān)鍵。據(jù)美國病理學(xué)會的研究報告,測α1AT用同一標(biāo)本,使用5種不同的方法在510個實驗室報告的結(jié)果從1.6-2.34g/L。同一研究中C3補體的測定采用了8種不同方法,測定結(jié)果為149-282mg/L。
世界衛(wèi)生組織目前提供以下參考標(biāo)準(zhǔn)品:IgG 、IgA、IgM、IgD、IgE、αFP、CEA、Alb、C3、CER及TRP。使用國際單位(IU),沒有使用絕對的質(zhì)量單位。美國疾病控制中心(CDC)供應(yīng)的國家參考標(biāo)準(zhǔn)品人血清蛋白質(zhì)含13種蛋白質(zhì),亦使用WHO的國際單位標(biāo)明含量。
由于不易獲得穩(wěn)定的抗血清和標(biāo)準(zhǔn)化的參考蛋白質(zhì),各個實驗室還不得不根據(jù)自己的條件建立自己的正常參考值。
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