常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有：①正向定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定：凡紅細胞出現(xiàn)凝集者為陽性，呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

　　2.鑒定方法

　　（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

　　紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

　　玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個游離紅細胞為（++++）。②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個游離紅細胞為（+++）。③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數(shù)細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。⑤可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。⑥可見極少數(shù)紅細胞凝集，而大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。

　　（2）凝膠微柱法：是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結(jié)果準確性。

　　3.抗A、抗B和抗AB標準血清標準

　　準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。

　　4.血型鑒定操作時注意事項

　　一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。④幼兒紅細胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內(nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。