常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據抗原抗體存在的情況判定血型。常規的方法有：①正向定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結果判定：凡紅細胞出現凝集者為陽性，呈散在游離狀態為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

　　2.鑒定方法

　　（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

　　紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

　　玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。

　　（2）凝膠微柱法：是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

　　3.抗A、抗B和抗AB標準血清標準

　　準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。

　　4.血型鑒定操作時注意事項

　　一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。④幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。⑥正、反定型結果一致才可發報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。