(一)電解質

　　抗原與抗體發生特異性結合后，雖由親水膠體變為疏水膠體，若溶液中無電解質參加，仍不出現可見反應。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1-，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢下降。當電勢降至臨界電勢(12～15mV)以下時，則能促使抗原抗體復合物從溶液中析出，形成可見的沉淀物或凝集物。

　　(二)酸堿度

　　抗原抗體反應必須在合適的pH環境中進行。蛋白質具有兩性電離性質，因此每種蛋白質都有固定的等電點。抗原抗體反應一般在pH為6～8進行。PH過高或過低都將影響抗原與抗體的理化性質，例如pH達到或接近抗原的等電點時，即使無相應抗體存在，也會引起顆粒性抗原非特異性的凝集，造成假陽性反應。

　　(三)溫度

　　在一定范圍內，溫度升高可加速分子運動，抗原與抗體碰撞機會增多，使反應加速。但若溫度高于56℃時，可導致已結合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞;在40℃時，結合速度慢，但結合牢固，更易于觀察。常用的抗原抗體反應溫度為37℃。每種試驗都有其獨特的最適反應溫度，例如冷凝集素在4左右與紅細胞結合最好，20℃以上反而解離。

　　此外，適當振蕩也可促進抗原抗體分子的接觸，加速反應。