補體結合試驗的改良方法較多，較常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法(塑板法)等。目前以后兩種方法應用較為廣泛，因為可以節省抗原，血清標本用量較少，特異性也較好。以下敘述以小量法為例，即抗原、抗體、溶血素、羊紅細胞各加0.1ml，補體加0.2ml，總量為0.6ml。

　　(一)試劑

　　1.抗原試驗中用于檢測抗體的抗原應適當提純，純度愈高，特異性愈強。如使用粗制抗原時，須經同樣處理的正常組織作抗原對照，以識別待檢血清中可能存在的、對正常組織成分的非特異性反應。

　　2.抗原和抗本的滴定補體結合試驗中，抗原與抗體按一定比例結合，因而應通過試驗選擇適宜的濃度比例。多采用方陣法進行滴定，選擇抗原與抗體兩者都呈強陽性反應(100%不溶血)的最高稀釋度作為抗原和抗體的效價(單價)。滴定方法舉例如表14-4。在試管中加入不同稀釋度的抗原，配加不同稀釋度的抗血清，另作不加抗原的抗體對照管和不加抗血清的抗原對照管。按照試驗方法加補體和指示系統，溫育后觀察結果。在表14-4中可見1:64抗原和1:32抗體各作為1個單位。在正式試驗中，抗原一般采用2～4個單位(1:64～1:32)，抗體采用4個單位(1:8)。

　　表14-4抗原和抗體的方陣滴定

　　注：1、2、3、4分別表示溶血反應強度+、++、+++、++++;0為不溶血。

　　3.補體滴定按表14-5逐步加入各試劑，溫育后觀察最少量補體能產生完全溶血者，確定為1個實用單位，正式試驗中使用2個實用單位。如形14-5中的結果為1:60的補體0.12ml可產生完全溶血，按比例公式0.12×2:60=0.2:X計算，X=50;即實際應用中的2個補體實用單位應為1:50稀釋的補體0.2ml。

　　表14-5補體的滴定

　　(二)血清標本

　　采集血液標本后及時分離血清，及時檢驗或將血清保存于-20℃。血清在試驗前應先加熱56℃30min(或60℃3min)以破壞補體和除去一些非特異因素。血清標本遇有抗補本現象時可做下列處理之一：①加熱提高12;②-20℃凍融后離心去沉淀;③以3mmol/L鹽酸處理;④加入少量補體后再加熱滅活;⑤以白陶土處理;⑥通入CO2;⑦以小白鼠肝粉處理;⑧用含10%新鮮雞蛋清的生理鹽水稀釋補體。

　　(三)正式試驗

　　以小量法測定抗體的補體結合試驗為例。按表14-6逐步加入各種試劑，溫育后先觀察各類對照管，應與預期的結果吻合。陰性、陽性對照管中應分別為明確的溶血與不溶血;抗體或抗原對照管、待檢血清對照管、陽性和陰性對照的對照管都應完全溶血。綿羊紅細胞對照管不應出現自發性溶血。補體對照管應呈現2U為全溶，1U為全溶略帶有少許紅細胞，0.5U應不溶。如0.5U補體對照出現全溶表明補體用量過多;如2U對照管不出現溶血，說明補體用量不夠，對結果都有影響，應重復進行試驗。補體結合試驗結果，受檢血清不溶血為陽性，溶血為陰性。

　　表14-6測定抗體的補體結合試驗操作程序