在建立某一ELISA測定中，應對包被抗原或抗體的濃度和酶標抗原或抗體的濃度予以選擇，以達到最合適的測定條件和節省測定費用。下面以間接法測抗體和夾心法測抗原為例，介紹最適工作濃度的選擇方法。

　　(一)間接法測抗體

　　1.酶標抗抗體工作濃度的選擇

　　(1)用100ng/ml人IgG進行包被，洗滌。

　　(2)將酶標抗人IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中，保溫、洗滌。

　　(3)加底物顯色。加酸終止反應后，讀取吸亮度(A)，繪制曲線如圖15-10。讀取A值在1.0時的酶標抗體稀釋度，作為酶標抗體的工作濃度。該酶標抗人IgG的工作濃度應為1/1600。

　　2.棋盤滴定法選擇包被抗原工作濃度

　　(1)用包被液將抗原作一系列稀釋后進行包被，洗滌。

　　(2)將強陽性參考血清、弱陽性參考血清和陰性參考血清用稀釋液作1:100稀釋，加樣，保溫，洗滌。

　　(3)加按工作濃度稀釋的酶標抗人IgG抗體，保溫，洗滌。

　　(4)加底物顯色。加酸終止反應后讀取A值。

　　(5)選擇強陽性參考血清的A值為0.8左右、陰性參考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀釋度作為工作濃度。表15-1為本例的測定結果，表中數字為A值。從表中可見1:200為最舒適的工作濃度。

　　表15-1 間接ELISA法包被抗原工作濃度的選擇

　　(二)夾心法測抗原

　　在夾心法ELISA法中可用棋盤滴定法同時選擇包被抗體和酶標抗體的工作濃度，舉例如下(表15-2)：

　　表15-2 夾心ELISA包被抗體和酶標抗體工作濃度的選擇

　　(1)抗體免疫球蛋白用包被緩沖液稀釋至蛋白濃度為10、1和0.1μg/ml，分別在ELISA板上進行包被，每一濃度包括三個縱行，洗滌。

　　(2)在一個橫行各包被孔中加入強陽性抗原液，另一橫行加入弱陽性抗原液，第三橫行加入陰性對照液，保溫，洗滌。

　　(3)將酶標抗體用稀釋液稀釋成三個濃度，例如1:1000、1:5000和1:25000。分別加入每一包被濃度的一個縱行中，保溫，洗滌。

　　(4)加底物顯色。加酸終止反應后，讀取A值。

　　(5)以強陽性抗原的A值在0.8左右、陰性參考的A值小于0.1的條件作最適條件，據此選擇包被抗體和酶標抗體的工作濃度。從表15-2可看出包被抗體濃度可選用1μg/ml，酶標抗體的稀釋度可選為1:5000。為了進一步節省試劑，可以此濃度為基點，縮小間距再做進一步的棋盤滴定。