(一)熒光色素

　　許多物質都可產生熒光現象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：

　　1.異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4，最大吸收光波長為490495nm，最大發射光波長520530nm，呈現明亮的黃綠色熒光，結構式如下：

　　有兩種同分異結構，其中異構體Ⅰ型在效率、穩定性、與蛋白質結合能力等方面都更好，在冷暗干燥處可保存多年，是應用最廣泛的熒光素。其主要優點是：①人眼對黃綠色較為敏感，②通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。

　　2.四乙基羅丹明(rhodamine，RIB200)為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性質穩定，可長期保存。結構式如下：

　　最大吸收光波長為570nm，最大發射光波長為595～600nm，呈橘紅色熒光。

　　3.四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)結構式如下：

　　最大吸引光波長為550nm，最大發射光波長為620nm，呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明，可配合用于雙重標記或對比染色。其異硫氰基可與蛋白質結合，但熒光效率較低。

　　(二)其他熒光物質

　　1.酶作用后產生熒光的物質某些化合物本身無熒光效應，一旦經酶作用便形成具有強熒光的物質。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發出熒光，激發光波長為360nm，發射光波長為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。

　　2.鑭系螯合物某些3價稀土鑭系元素如銪(Eu3+)、鋱(Tb3+)、鈰(Ce3+)等的螯合物經激發后也可發射特征性的熒光，其中以Eu3+應用最廣。Eu3+螯合物的激發光波長范圍寬，發射光波長范圍窄，熒光衰變時間長，最適合用于分辨熒光免疫測定。