(一)熒光的產生

　　一此化學物質能從外界吸收并儲存能量(如光能、化學能等)而進入激發態，當其從激發態再回復到基態時，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發光)。

　　熒光發射的特點是：可產生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發光;而一旦停止供能，發光(熒光)現象也隨之在瞬間內消失。

　　可以引起發熒光的能量種類很多，由光激發所引起的熒光稱為致熒光。由化學應所引起的稱為化學熒光，由X線或陰極射線引起的分別稱為X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術一般應用致熒光物質進行標記。

　　(二)熒光效率

　　熒光分子不會將全部吸收的光能都轉變成熒光，總或多或少地以其他形式釋放。熒光效率是指熒光分子將吸收的光能轉變成熒光的百分率，與發射熒光光量子的數值成正比。

　　熒光效率=發射熒光的光量分子數(熒光強度)/吸收光的光量子數(激發光強度)

　　發射熒光的光量子數亦即熒光強度，除受激發光強度影響外，也與激發光的波長有關。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發射光譜(熒光光譜)，即在某一特定波長處有最大吸收峰和最大發射峰。選擇激發光波長量接近于熒光分子的最大吸收峰波長，且測定光波量接近于最大發射光波峰時，得到的熒光強度也最大。

　　(三)熒光的猝滅

　　熒光分子的輻射能力在受到激發光較長時間的照射后會減弱甚至猝滅，這是由于激發態分子的電子不能回復到基態，所吸收的能量無法以熒光的形式發射。一些化合物有天然的熒光猝滅作用而被用作猝滅劑，以消除不需用的熒光。因此熒光物質的保存應注意避免光(特別是紫外光)的直接照射和與其他化合物的接觸。在熒光抗體技術中常用一些非熒的色素物質如亞甲藍、堿性復紅。伊文思藍或低濃度的過錳酸鉀、碘溶液等對標本進行得當復染，以減弱非特異性熒光本質，使特異熒光更突出顯示。