以常用熒光素作為標記物的熒光免疫測定往往受血清成分、試管、儀器組件等的本底熒光干擾，以及激發(fā)光源的雜射光的影響，使靈敏度受到很大限制。時間分辨熒光免疫測定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay，TR-FIA)是針對這缺點加以改進的一種新型檢測技術。其基本原理是以鑭系元素銪(Eu)螯合物作熒光標記物，利用這類熒光物質有長熒光壽命的特點，延長熒光測量時間，待短壽命的自然本底熒光完全衰退后再行測定，所得信號完全為長壽命鑭系螯合物的熒光，從而有效地消除非特異性本底熒光的干擾。TR-FIA的測定原理見圖17-4。以雙抗體夾心法為例的測定反應程序見圖17-5。其中增強液的作用是使熒光信號增強。因為免疫反應完成后，生成的抗原-抗體-銪標記物復合物在弱堿性溶液中，經(jīng)激發(fā)后所產生的熒光信號甚弱。在增強液中可至pH2～3，銪離子很容易解離出來，并與增強液中的β-二酮體生成帶有強烈熒光的新的銪螯合物，大大有利于熒光測量。

　　所用檢測儀器為時間分辨熒光計，與一般的熒光分光光度計不同，采用脈沖光源(每秒閃爍1000次的氙燈)，照射樣品后即短暫熄滅，以電子設備控制延緩時間，待非特異本底熒光衰退后，再測定樣品發(fā)出的長鑭系熒光。檢測靈敏度可達0.2～1ng/ml。