分離相當純化的淋巴細胞亞群是細胞免疫檢驗的基本技術。其原則是根據相應細胞的特性和不同的標志加以選擇性純化。凡根據細胞的特性和標志選擇純化所需細胞的方法是陽性選擇法;而選擇性去除不要的細胞，僅留下所需的細胞是為陰性選擇。常用以下幾種方法：

　　(一)E花環沉降法

　　本法是將淋巴細胞與一定比例的綿羊紅細胞混合，待淋巴細胞形成E花環后，繼用淋巴細胞分層液分離細胞。浮懸在分層界面而不形成E花環的群則富含B細胞，而沉降在管底的形成E花環的細胞用低滲法處理，使圍繞細胞周圍的綿羊紅細胞快速裂解，則獲得純的T細胞。

　　(二)尼龍毛分離法

　　本法利用B細胞和單核細胞具有易粘附于尼龍纖維表面的特性，可將T和B細胞分開。操作原則是取松散而經過處理的尼龍毛(聚酰胺纖維)，均勻充填在內徑5～6nm的聚乙烯塑料管(飲料管即可)內，經Hanks液浸透保溫，將單個核細胞懸液加入柱內，放37溫箱靜置1～2h。用預溫的含10%～20%小牛血清培養液灌洗，洗脫液內含有非粘附的T細胞，重復灌洗幾次以除去管內殘留的T細胞。再用冷或溫培養液邊沖邊洗邊擠壓塑料管，此時洗脫液內富含B細胞。如此得到的T細胞純度在90%以上，B細胞純度可達80%。

　　(三)親和板結合分離法

　　利用親和層析法分離淋巴細胞亞群，其原理是各種淋巴細胞亞群具有不同的抗原性，將相應抗體結合于塑料平板上，繼加細胞懸液，凡抗原陽性的細胞則與相應抗體結合，抗原陰性的細胞可從未吸附的細胞懸液中獲取。同樣若用特異性抗原交聯在塑料板上，則可分離得具有特異抗原受體的淋巴細胞。淋巴細胞受體與特異抗原或抗體接觸，可引起細胞激活，因此，凡欲去除細胞懸液內某一細胞亞群時，本法更適用。如要分離CD4+或CD8+細胞，則可用抗CD4或CD8單克隆抗體吸附。用抗Ig抗體則可分離B細胞。同樣，用活化的C3包被，可分離出有C3受體的細胞。

　　(四)熒光激活細胞分離儀分離法

　　熒光激活細胞分離儀(fluorescenceactivatedcellsorter，FACS)主要由4部分組成：①細胞流動系統及氣壓流速控制系統，②激光系統，③檢測與訊號處理系統，④細胞分選系統。其主要原理是細胞經熒光染色后，通過高速流動系統，細胞排成單行，逐個流經檢測區進行測定。當細胞從流動室噴嘴處流出時，超聲振蕩攪動液流，使液流斷裂成一連串的均勻小滴(40000個/s)，每小滴內最多含一個細胞(其中只有百分之幾的液滴中含細胞)，細胞經激光束照射產生熒光和散射光，由光電倍增管接收，轉換成脈沖信號，數據經電腦處理，分辨細胞的類型。如識別的是預計所需的細胞時(如T細胞、B細胞要其亞群)，在細胞樣品流斷裂成小滴時，使液滴瞬即感應陽電荷、陰電荷或不帶電荷，使所需的細胞在電場偏轉下進入不同的收集管。用FACS分離細胞準確快速，能保持細胞活力，并可在無菌條件下進行，但儀器昂貴，極少用于常規，而多數僅作為研究的手段。