本試驗又稱T細胞轉(zhuǎn)化試驗。T細胞在體外經(jīng)某種物質(zhì)刺激，細胞代謝和形態(tài)相繼發(fā)生變化，主要表現(xiàn)為短時間內(nèi)細胞表面電荷即起變化，數(shù)小時后細胞內(nèi)酶活化，在24～48h細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸合成增加，從而產(chǎn)生一系列增殖的變化，如細胞變大、細胞漿擴大、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、染色質(zhì)疏松、淋巴細胞轉(zhuǎn)變成母細胞(圖21-2)。因此，這種淋巴細胞增殖又稱淋巴母細胞轉(zhuǎn)化(lymphoblasttransformation)。淋巴細胞增殖反應(yīng)既可通過形態(tài)學(xué)觀察計數(shù)，也可用3H-TdR摻入法檢測細胞內(nèi)DNA合成量的增加，據(jù)此判斷出淋巴細胞對有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)。

　　圖21-2 淋巴細胞轉(zhuǎn)化的形態(tài)特征

　　體外引起淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物種類很多，可分為非抗原性刺激物和抗原性刺激物兩類。

　　1.非抗原性刺激物如植物血凝系(phytoagglutinin，PHA)、刀豆素A(concanavalinA，ConA)、美洲商陸(pokeweedmitogen，PWM)和脂多糖(LPS)等，通稱促有絲分裂原(mitogen)。其中LPS刺激B細胞，PWM可刺激T和B兩類細胞，PHA和ConA刺激T細胞增殖。

　　2.抗原性刺激物如破傷風(fēng)類毒素、鏈球菌激酶、純化蛋白衍生物(purifiedproteinderivative，PPD)和白色念珠菌等。同種異型組織抗原也可作為刺激物，例如HLA，用混合淋巴細胞培養(yǎng)法觀察器官移植中受體細胞對供體細胞的反應(yīng)性實質(zhì)上也是一種淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗。

　　非抗原性刺激物可使正常人外周血中的淋巴細胞引起轉(zhuǎn)化，與機體是否對某種抗原致敏無關(guān)，因此屬非特異的淋巴細胞轉(zhuǎn)化。抗原刺激物的作用只能使相應(yīng)致敏的淋巴細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，因此轉(zhuǎn)化率大大低于非特異性轉(zhuǎn)化。通常應(yīng)用最多的刺激物是PHA，特異性抗原僅使已經(jīng)相應(yīng)抗原致敏的T細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化率一般約5%～30%，而且需要培養(yǎng)4～5天。雖然T細胞對特異和非特異性抗原的識別過程不同，但被激活后，誘發(fā)的分裂和增殖過程卻是相同。因此根據(jù)非特異性促有絲分裂原激活T細胞增殖反應(yīng)的程度，同樣可推測T細胞識別特異性抗原增殖反應(yīng)。目前淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗是判斷T細胞功能的一項常用的非特異性體外免疫學(xué)檢測指標。

　　該試驗有形態(tài)計數(shù)法和同位素計數(shù)法兩種。

　　(一)形態(tài)法

　　其原則是將外周血液或分離的單個核細胞與適量的PHA混合，置37℃培養(yǎng)72h，取培養(yǎng)細胞作涂片染色鏡檢。根據(jù)細胞的大小，核與胞漿的比例，胞漿的染色性和核結(jié)構(gòu)以及有無核仁等特征，分別計數(shù)淋巴細胞、過渡型母細胞和核有絲分裂相細胞以及成熟的小淋巴細胞，以前三者為轉(zhuǎn)化細胞，每份標本計數(shù)200個細胞，按下列計算轉(zhuǎn)化率：

　　轉(zhuǎn)化率=轉(zhuǎn)化的淋巴細胞數(shù)/(轉(zhuǎn)化的淋巴細胞數(shù)+未轉(zhuǎn)化的淋巴細胞數(shù))×100%

　　在正常情況下，健康人外周血經(jīng)PHA刺激的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率為60%～80%，小于50%可視為降低。形態(tài)學(xué)方法簡便易行，便于基層實驗室推廣采用，但判讀結(jié)果受主觀因素影響較大，有些細胞形態(tài)難以確認，因此重復(fù)性和可靠性較差。

　　(二)同位素法

　　絕大多數(shù)外周血中T細胞通常處于細胞周期的G0期，受特異性抗原或促有絲分裂原激活后，從G0期進入G1期，并合成蛋白質(zhì)、RNA和DNA前體物質(zhì)等，為DNA復(fù)制準備物質(zhì)基礎(chǔ)，然后進入S期，細胞合成DNA量倍增，此時若在培養(yǎng)液中加3H標記的DNA前體(3H胸腺嘧啶苷，3H-TdR)，后者即摻入新合成的DNA中，根據(jù)摻入的多少推測細胞增殖程度。檢測原則是將全血或分離的單個核細胞懸液加入含培養(yǎng)液的試管中，每份樣品分實驗管和對照管，實驗管加最適量和亞適量PHA后，移置5%CO2溫箱37℃培養(yǎng)56h，加適量3H-TdR，繼續(xù)培養(yǎng)16h，結(jié)束后將細胞收集在玻璃纖維膜上，遞經(jīng)處理，最后用液體閃爍器測量，記錄每分鐘脈沖數(shù)(cpm)，算出3個復(fù)管的均數(shù)±S。通常以刺激指數(shù)(SI)表示轉(zhuǎn)化能力。

　　SI=PHA刺激管cpm均值/對照管cpm均值

　　由于對照管組和刺激組實驗條件一致，故用SI表示淋巴細胞增殖能力可以減少可變因素的干擾，但對照組同位素摻入量的增加或減少，能使SI發(fā)生明顯變動，以致有時不能反映真實的增殖情況，因此最好同時參照對照組和實驗組的cpm加以判斷。值得強調(diào)的是目前配制的PHA多為最適濃度，在該條件下，功能略遜的細胞仍有應(yīng)答能力。如同時采用最適和亞適濃度，一些細胞免疫功能較低的T細胞對亞適濃度的PHA則缺乏或僅呈極弱的應(yīng)答，故在一定程度上可識別出應(yīng)答功能較差的T細胞群。