一、生物學檢測法

　　TNF的主要生物學活性之一就是對某些腫瘤細胞的細胞毒作用。根據這一特點，可利用TNF敏感的靶細胞測定TNF活性，根據細胞死亡得出TNF的相對活性。該法的關鍵是選擇敏感特異的靶細胞。靶細胞可以是長期傳代培養的細胞系，也可以是新鮮分離的原代細胞(如瘤細胞)。現以貼壁生長的L929細胞為例，簡述TNF活性的檢測原則。

　　兩種TNF均可傷體外培養的L929細胞，細胞死亡率與TNF活性成正比。某些染料如中性紅、結晶紫等能使活細胞染上相應顏色，再用脫色液將染料脫出，通過測定其吸亮度值間接監沒細胞存活狀態。

　　試驗原則是收集對數生長期的L929細胞，用培養液調細胞至適當濃度，加入培養板小孔中，置37℃，5%CO2溫箱中培養16～24h，換液后，在各孔中加入不同稀釋度的待檢樣品，再加適當濃度的放線菌素D和適量培養液，繼續溫育16～24h，棄培養液，經Hanks液洗滌后，每孔加入適當濃度的結晶紫染色液，37℃培養1h，使活細胞充分著色。然后各孔加1%SDS短時溫育使染色細胞溶解，再以酶標測定儀測各孔A570nm值。每次檢測均設培養液(陰性)對照和不同濃度的rTNF(陰性)對照。以使陰性對照50%細胞溶解的標本最大稀釋倍數為TNF活性單位，以u/ml表示。

　　由于放線菌素D能抑制DNA的合成、降低靶細胞對損傷的修復機制，因而在檢測中加入放線素D可使靶細胞對TNF的敏感性增高10～200倍。

　　二、免疫學檢測法

　　通常采用ELISA，該法特異性高、敏感性強且快速使捷，而且能夠區別TNFα和TNFβ，為臨床檢測病人血清中TNF水平的有效方法，但不能反映TNF活性。

　　三、其它檢測法

　　檢測TNF還可用生物發光法及NAG微量酶反應比色法。這類方法是應用生化技術檢測細胞內代謝的變化，從而推知靶細胞功能變化及死亡情況。其優點是不僅反映細胞的死亡情況，而且能反映細胞的功能變化。此外，還具有快速、方便、微量的特點。