現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的白細(xì)胞介素(IL)多達(dá)10余種，茲舉有代表性的幾種IL檢測(cè)法藉以舉一反三。

　　一、IL-1的檢測(cè)

　　IL-1有兩種分子形式，即IL-1α和IL-2β，它們的生物學(xué)活性基本相同，均可采用生物學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，若要區(qū)分IL-1α和IL-2β需用免疫學(xué)檢測(cè)法。

　　(一)細(xì)胞增殖法

　　1.淋巴細(xì)胞增殖法IL-1具有淋巴細(xì)胞活化因子的活性，可以協(xié)同促有絲分裂原刺激T細(xì)胞或胸腺細(xì)胞發(fā)生有絲分裂，同時(shí)IL-1可以刺激T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2或其它T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，并使之表達(dá)相應(yīng)的受體。因此用細(xì)胞增殖法檢測(cè)IL-1可有直接增殖法和間接增殖法兩種。

　　(1)直接增殖法：IL-1在促有絲分裂原存在的情況下，能夠促使胸腺淋巴細(xì)胞和某些體外建株的T細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，因此測(cè)定這些細(xì)胞的增殖情況即可反映IL-1的活性。小鼠胸腺細(xì)胞測(cè)定法操作簡(jiǎn)單，比較常用，缺點(diǎn)是缺少特異性，因?yàn)镮L-2亦可協(xié)同促有絲分裂原刺激胸腺細(xì)胞增殖。D10G4.1(一種小鼠TH細(xì)胞克隆)測(cè)定法較胸腺細(xì)胞測(cè)定法的敏感性高，且D10G4.1對(duì)IL-2不敏感，因此特異性增強(qiáng)，缺點(diǎn)是需要長(zhǎng)期飼養(yǎng)細(xì)胞株，該實(shí)驗(yàn)以3H-TdR摻入法或MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。通常IL-1濃度越高，細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力越強(qiáng)，IL-1濃度低于0.05ng/ml時(shí)，細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力接近促有絲分裂原單獨(dú)刺激的程度。

　　(2)間接增殖法：某些品系小鼠的T細(xì)胞系只有在IL-1存在的條件下才能產(chǎn)生IL-2，并且IL-2的產(chǎn)生量與IL-1的濃度成直線關(guān)系。因此可以利用IL-2依賴細(xì)胞株(如CTLL2)測(cè)定IL-2，藉以間接測(cè)定IL-1的含量。

　　2.成纖維細(xì)胞增殖法IL-1能刺激成纖維細(xì)胞的增殖，故可利用來源于新生兒包皮或傳代的人皮膚成纖維細(xì)胞(如CRL1445)測(cè)定IL-1。國(guó)內(nèi)常用小鼠成纖維細(xì)胞瘤L929細(xì)胞株。

　　檢測(cè)原則是將生長(zhǎng)成單層的L929細(xì)胞用胰酶消化后，配成適當(dāng)濃度的細(xì)胞懸液，繼將不同稀釋度的待測(cè)樣本與L929細(xì)胞懸液分加入96孔培養(yǎng)液中。一式三份，并設(shè)置陰性對(duì)照，放入37℃、5%CO2的溫箱中溫育72h，在第16h時(shí)加入適量3H-TdR，繼續(xù)溫育，結(jié)束后離心棄去培養(yǎng)上清，加入適量胰酶消化數(shù)分鐘后，收集細(xì)胞測(cè)定cpm值或吸光度值。

　　(二)其他方法

　　1.骨和較骨組織測(cè)定法利用IL-1可誘導(dǎo)膠原酶釋放，破壞軟骨組織的特性，用分光光度計(jì)測(cè)定軟骨硫酸鹽釋放量，即可間接椎知IL-1量。又如IL-1能影響骨質(zhì)吸收，應(yīng)用放射性45Ca通過小鼠頭頂骨系統(tǒng)吸收可測(cè)定IL-1活性，為骨質(zhì)吸收釋放法。

　　2.PGE2測(cè)定法IL-1作用于下丘腦，誘導(dǎo)腦細(xì)胞合成前列腺素E2(PGE2)，發(fā)揮致熱原作用;還能誘導(dǎo)原代培養(yǎng)或建株傳代的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生PGE2，故可用放免疫技術(shù)測(cè)定PGE2藉以間接測(cè)定IL-1。

　　3.放射免疫測(cè)定法本法利用受檢IL-1樣品與碘標(biāo)記IL-1競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合Sepharose4B中抗IL-1抗體結(jié)合位點(diǎn)的原理而設(shè)計(jì)。該法敏感性較高，且可排除樣品中其它干擾因素的影響，其特點(diǎn)是可以區(qū)分IL-1α和IL-1β。

　　4.體內(nèi)測(cè)定法IL-1在體內(nèi)可誘導(dǎo)發(fā)熱、引起急性期蛋白合成及影響血中鐵和鋅水平。實(shí)驗(yàn)室多利用IL-1的致熱原作用加以檢測(cè)。在給動(dòng)物靜脈注射IL-1前后，以體溫的升高幅度表示IL-1的活性，或定期測(cè)定血清中某些急性期蛋白的含量，如血清淀粉樣蛋白A，血清淀粉樣蛋白P等。

　　總之，由于IL-1的生物學(xué)活性比較廣泛，其檢測(cè)方法亦多種多樣，但每種方法均有其缺點(diǎn)，往往需要結(jié)合使用。T細(xì)胞增殖法簡(jiǎn)便、易行且敏感，但樣品中若混有IL-2，則可協(xié)同促有絲分裂原刺激T細(xì)胞增殖，從而干擾IL-1的測(cè)定。血清中的TNF同樣可以刺激成纖維細(xì)胞的增殖，也可用成纖維細(xì)胞測(cè)定法，但特異性較差。放免法可排除其它因子的干擾，但此法僅測(cè)得IL-1的抗原性，不能完全代表其生物學(xué)活性。

　　二、IL-2的檢測(cè)

　　IL-2的檢測(cè)方法主要有兩大類，一類是細(xì)胞增殖法，另一類是免疫學(xué)檢測(cè)法。

　　(一)細(xì)胞增殖法

　　IL-2可刺激某些淋巴細(xì)胞增殖，根據(jù)細(xì)胞增殖情況可反映IL-2的活性，結(jié)果以U/ml表示。目前所用的IL-2反應(yīng)細(xì)胞主要有CTLL、CTB6、F12、CTLL-2等小鼠IL-2依賴細(xì)胞株以及ConA活化的小鼠淋巴母細(xì)胞和小鼠胸腺細(xì)胞。這類細(xì)胞的增殖情況均可通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)、3H-TdR摻入法以及MTT法加以測(cè)定。

　　1.依賴性細(xì)胞株增殖法IL-2依賴細(xì)胞株在IL-2存在時(shí)才能生長(zhǎng)，而對(duì)PHA、ConA等促有絲分裂原及IL-2以外的其它細(xì)胞因子均無反應(yīng)。CTLL-2對(duì)IL-2的依賴性最強(qiáng)，表現(xiàn)為在單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)3H-TdR的摻入量低，而在IL-2存在時(shí)摻入值高，故為首選的靶細(xì)胞株。

　　2.T淋巴母細(xì)胞增殖法T細(xì)胞經(jīng)植物血凝素激發(fā)轉(zhuǎn)化為T淋巴母細(xì)胞，并表達(dá)豐富的IL-2受體，在體外IL-2存在時(shí)持續(xù)增殖，并與IL-2含量呈劑量依賴關(guān)系。

　　3.胸腺細(xì)胞增殖法IL-2可以增另ConA的促有絲分裂原作用而引起T血細(xì)胞大量增殖。將一定數(shù)量的小鼠胸腺細(xì)胞與亞刺激量的ConA和不同稀釋的待檢標(biāo)本共育，在一定時(shí)間后檢測(cè)IL-2增殖情況即能代表IL-2的活性。胸腺細(xì)胞增殖試驗(yàn)是目前檢測(cè)IL-2活性最簡(jiǎn)便的方法。此法缺點(diǎn)是敏感性較差，如待測(cè)標(biāo)本中存留有ConA會(huì)出現(xiàn)較強(qiáng)的非特異性反應(yīng)等。

　　(二)免疫學(xué)檢測(cè)法

　　根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的原理，可利用抗IL-2的單克隆或多克隆抗體直接測(cè)定樣品中的IL-2含量，結(jié)果用ng/ml表示。本法在rIL-2生產(chǎn)制備過程中可用以跟蹤檢測(cè)，在rIL-2基因克隆時(shí)亦可對(duì)陽性質(zhì)粒進(jìn)行初步篩選。

　　三、IL-3的檢測(cè)

　　IL-3又名多能集落刺激因子(multi-CSF)，在刺激多能造血干細(xì)胞及造血前體細(xì)胞的分化及增殖方面具有重要作用。目前檢測(cè)IL-3的方法多根據(jù)其對(duì)某些IL-3反應(yīng)性細(xì)胞促增殖及分化作用而設(shè)計(jì)。

　　IL-3能刺激多種細(xì)胞增殖，因此測(cè)定IL-3反應(yīng)細(xì)胞的增殖情況即可反映IL-3的活性。目前常用于細(xì)胞增殖法的IL-3反應(yīng)細(xì)胞有骨髓干細(xì)胞、骨髓來源的IL-3依賴株及肥大細(xì)胞等。此外，也可取小鼠脛骨和股骨骨髓細(xì)胞加受檢樣品，制成瓊脂平板，置5%CO237℃溫育1周后，計(jì)數(shù)集落形成數(shù)，凡細(xì)胞數(shù)等于或大于40～50個(gè)的細(xì)胞團(tuán)塊計(jì)為一個(gè)集落，根據(jù)形成集落數(shù)的多少判斷IL-3的活性。

　　IL-3除刺激骨髓細(xì)胞增殖外，也能活化骨髓細(xì)胞使其釋放組胺等生物活性物質(zhì)。將小鼠骨髓細(xì)胞與不同稀釋度的待檢樣品共溫48h后，用熒光法檢測(cè)培養(yǎng)上清中組織胺含量也能反映IL-3的活性。