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　　血涂片制備與染色

　　血涂片是通過特定的方法將血液按一定方向均勻涂開的過程，微觀上使細胞是由球形變為平面形或近平面形平鋪在載玻片上。血涂片的顯微鏡檢查是血液細胞形態學檢查的基本步驟，特別是對于各種血液病的診斷和鑒別診斷，具有重要價值。血涂片制備是否合格、染色的好壞直接關系到檢驗結果的質量。

　　(一)血涂片制備

　　1.載玻片的準備

　　新載玻片常帶有游離堿質，須用濃度為lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水徹底沖洗，干燥后備用。舊載玻片要用含洗滌劑的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反復沖洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥備用。

　　使用載玻片時，不要用手觸及玻片表面，保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩。

　　2.血涂片制作方法

　　取血液標本一滴置載玻片的一端，以邊緣平滑的推片一端，從血滴前沿方向接觸血液，使血液沿推片散開，推片與載玻片保持30～45○夾角，平穩地向前推動，血液即在載玻片上形成薄層血膜。

　　涂片的厚薄與血滴大小、推片與載玻片之間的角度、推片時的速度及血細胞比容有關。血滴大、角度大、速度快則血膜越厚;反之則血膜越薄。

　　一張良好的血涂片，要求厚薄適宜，頭體尾明顯，細胞分布均勻，血膜邊緣整齊并留有的空隙。

　　(二)血涂片染色

　　染色的目的是使細胞的主要結構，如細胞膜、細胞質、細胞核等染上不同的顏色，以便于鏡下觀察識別。

　　血涂片染色包括兩個過程：固定和染色。固定是將細胞蛋白質和多糖等成分迅速交聯凝固，以保持細胞原有形態結構不發生變化。常用的染色方法有瑞特染色法(Wright)、姬姆薩染色法(Giemsa)等。

　　1.瑞特(Wright)染色法

　　本法的特點是將固定和染色合并在一起進行，手續簡便，染色時間短，對白細胞特異性顆粒著色較好，但對核的著色略差。

　　2.姬姆薩(Giemsa)染色法姬姆薩染料由天青和酸性染料伊紅組成的復合染料。染色原理、緩沖液與瑞特染色法大致相同。本法對細胞核結構和寄生蟲著色較好，結構顯示更為清晰，但細胞質和顆粒著色較差。

　　3.瑞-姬染色法

　　瑞特染色液和姬姆薩染色液對細胞進行染色時有各自的顯色特征，前者對細胞漿和顆粒著色較好，后者對對細胞核結構顯示清晰。因此將瑞特染料和姬姆薩染料混合，甲醇溶解后組成瑞-姬染色液能取長補短，優勢互補，其中所使用的緩沖液與瑞特染色法相同。用該混合染液對血細胞進行染色，細胞核、細胞漿和細胞內顆粒著色均有上佳表現，著色鮮艷，對比鮮明，是臨床上廣泛使用的方法。

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