異煙肼是一種不穩定的藥物，其中的游離肼是由制備時原料引入，或在貯存過程中降解而產生。而肼又是一種誘變劑和致癌物質，因此國內外藥典多數規定了異煙肼原料藥及其制劑中游離肼的限量檢查。中國藥典對異煙肼原料和注射用異煙肼中游離肼的檢查均采用薄層色譜法。

　　檢查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg(相當于游離肼50μg)的溶液，作為對照溶液。吸取供試液10μl 與對照溶液2μl，分別點于同一硅膠薄層板(用羧甲基纖維素鈉溶液制備)上，以異丙醇-丙酮(3:2)為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對二甲氨基苯甲醛試液，15min后檢視，在供試品主斑點前方與硫酸肼斑點相應的位置上，不得顯黃色斑點。

　　異煙肼斑點呈棕橙色的清晰斑點，rf值約為0.21。游離肼斑點呈鮮黃色，rf值約為0.3。本法檢出肼的靈敏度為0.1μg，檢出限量約為0.02%。