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　　薄層色譜法

　　薄層色譜法(thin layer chromatography，TLC)系將供試品溶液點(diǎn)樣于涂布有固定相的薄層板上，經(jīng)展開、檢視后所得的色譜圖，與適宜的對(duì)照物按同法操作所得的色譜圖進(jìn)行比較，主要用于藥品的鑒別或雜質(zhì)檢查。

　　考點(diǎn)1：薄層色譜法的操作方法

　　制板——點(diǎn)樣——展開——定位——結(jié)果

　　制版：將固定相涂布在薄板上

　　常用固定相：硅膠、硅藻土、氧化鋁、微晶纖維素、聚酰胺

　　涂布方法：研磨——除氣泡——涂布——晾干——活化

　　活化方法：在ll0℃加熱30分鐘(目的：使硅膠吸附力增強(qiáng))

　　點(diǎn)樣：將樣品點(diǎn)在薄層板上

　　點(diǎn)樣要求：一般為圓點(diǎn)圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2cm，樣點(diǎn)直徑為2～4mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜，一般為1.0～2.0cm。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層板表面。

　　展開劑：可以是單一溶劑，可以用是不同試劑按一定比例組成的混合溶劑。浸入展開劑的深度為距薄層底邊0.5～1.0cm(切勿將樣品點(diǎn)浸入展開劑中)

　　定位：記錄展開劑前沿，及各斑點(diǎn)的位置

　　結(jié)果檢視：

　　光學(xué)法：有色斑點(diǎn)、熒光淬滅、發(fā)射熒光：254nm，365nm

　　化學(xué)法：顯色劑顯色

　　考點(diǎn)2：色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　包括：檢測(cè)靈敏度、比移植、分離效能

　　1.檢測(cè)靈敏度

　　采用對(duì)照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對(duì)照溶液在規(guī)定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點(diǎn)樣、展開、檢視，前者應(yīng)顯示清晰的斑點(diǎn)。

　　2.比移植

　　實(shí)踐中，Rf值的最佳范圍是0.3～0.5，可用范圍是0.2～0.8。

　　3.分離效能

　　分離效能以分離度表示，分離度(R)系指兩個(gè)相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)的平均寬度(直徑)的比值。

　　R = 2d/(W1+W2)

　　考點(diǎn)3：薄層色譜的應(yīng)用

　　1.定性分析：供試品、對(duì)照品點(diǎn)在同一薄層板上→展開顯色后→供試品、對(duì)照品比移值一致→可認(rèn)為供試品與對(duì)照品是同一物質(zhì)。

　　2.純度檢查：

　　對(duì)照法：供試品、雜質(zhì)、對(duì)照品點(diǎn)在同一薄層板上→…→雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與對(duì)照品斑點(diǎn)比較，不得更深→可認(rèn)為未超過規(guī)定的含雜質(zhì)最高限量。

　　自身稀釋對(duì)照法：以供試品溶液的稀溶液作為對(duì)照液，方法同上

　　判斷：

　　A、供試品所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)與對(duì)照液主斑點(diǎn)比較，不得更深

　　B、規(guī)定供試品雜質(zhì)斑點(diǎn)的個(gè)數(shù)

　　硅膠薄層板使用前在110℃加熱30分鐘，這一過程稱為

　　A.去活化

　　B.活化

　　C.再生

　　D.飽和

　　E.平衡

　　『正確答案』B

　　關(guān)于薄層色譜的點(diǎn)樣與展開，以下敘述正確的是

　　A.點(diǎn)樣的樣點(diǎn)必須為圓點(diǎn)

　　B.點(diǎn)樣基線距底邊越近越好，一般小于1.Ocm

　　C.樣點(diǎn)直徑一般為2～4cm

　　D.每塊板只能點(diǎn)1個(gè)樣點(diǎn)，以防斑點(diǎn)間干擾

　　E.展開時(shí)，薄層板浸入展開劑的深度為距薄層底邊0.5～1.0cm

　　『正確答案』E

　　多項(xiàng)選擇題

　　薄層色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的內(nèi)容有

　　A.檢測(cè)靈敏度

　　B.精密度

　　C.比移值

　　D.拖尾因子

　　E.分離效能

　　『正確答案』ACE

　　斑點(diǎn)定位法常用的顯色劑有

　　A.碘

　　B.硫酸溶液

　　C.熒光黃溶液

　　D.茚三酮

　　E.四氮唑鹽

　　『正確答案』ABCD

　　『答案解析』顯色劑有通用型和專用型兩種。通用型顯色劑有碘、硫酸溶液、熒光黃溶液等，可使許多物質(zhì)顯色。如碘可使生物堿、氨基酸衍生物、肽類、脂類及皂苷等顯色;專用顯色劑可使某個(gè)或某類化合物顯色，如茚三酮可使氨基酸顯色。顯色方法有直接噴霧法、浸漬法和壓板法等。

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