生物樣品分析前處理技術

　　血樣、組織(去蛋白)、唾液(去除黏蛋白)、尿液(綴合物水解)

　　去除蛋白質：

　　(1) 加入與水相混溶的有機溶劑(甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、丙醇、四氫呋喃)。 原理：可使蛋白質的分子內及分子間的氫鍵發生變化而使蛋白質凝聚，使與蛋白質結合的藥物釋放出來。可除去90%蛋白

　　(2) 加入中性鹽，如(NH4)2SO4，Na2SO4等。原理：離子強度發生變化，脫水。可除去90%蛋白

　　(3) 加入強酸(10%三氯乙酸、6%高氯酸等)pH值低于蛋白質等電點pH 時，與蛋白質陽離子形成不溶性鹽而沉淀。可除去90%蛋白

　　(4) 加入Zn2+、Cu2+，pH值高于蛋白質等電點 pH時，與蛋白質陰離子形成不溶性鹽而沉淀。

　　(5) 酶解法(蛋白水解酶——枯草菌溶素)使組織酶解，釋放出藥物，不會發生乳化，對與蛋白結合牢固的藥物可顯著改善回收率。堿不穩定藥物不宜用

　　綴合物的水解：酸水解、酶水解

　　有機破壞

　　分離、純化與濃集：

　　(1)液-液萃取(LLE)

　　(2)液-固萃取(LSE)：即一種柱色譜分離方法

　　(3)濃集：①末次萃取時加入萃取量盡量減少;②揮去萃取溶劑法(氮氣吹干或減壓法);③柱切換HPLC 法

　　化學衍生化

熾灼后的硫代乙酰胺法

　　適用范圍：適用于含芳環、雜環以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機藥物。

　　注意事項：

　　① 溫度對重金屬檢查影響較大，溫度越高重金屬損失越多，應控制熾灼溫度 500-600℃(高溫易揮發).

　　② 殘渣加硝酸加熱處理后，必須蒸干，除盡氧化氮，否則亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色。

　　③ 含鈉及氟的有機藥物應用鉑坩堝、石英坩堝或硬質玻璃蒸發皿，因可腐蝕瓷坩堝帶入重金屬。

氯化物檢查法

　　原理：對照法。 利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀膠體微粒而顯白色混濁液，與一定量標準氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀混濁程度比較，濁度不得更大。 Cl-+Ag+—>AgCl↓(白)

　　注意事項：

　　① 氯化物濃度以50ml溶液中含50～80μg的Cl為宜，因為此時濁度梯度好。

　　② 加硝酸可避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的干擾，加速AgCl的生成并產生較好的乳光渾濁

　　③ 酸度要求：50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜

　　④ 供試品溶液有顏色時的處理方法：內消色法：

　　⑤ 供試品溶液顯堿性的處理方法：先中和成中性后再檢查(加硝酸)

　　⑥ 供試品溶液不澄清的處理方法：過濾，之前要用硝酸沖洗濾紙。

鐵鹽檢查法

　　方法：①硫氰酸鹽法 Ch.P、USP;②巰基醋酸法 BP

　　原理：鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨溶液作用生成紅色可溶性的硫氰酸鐵配離子，與一定量標準鐵溶液用同法處理后進行比色。 Fe3+ +nSCN-→[Fe(SCN)n]3-n (n=1~6)

　　注意事項：

　　① 準鐵貯備液的配制：用硫酸鐵銨[FeNH4(SO4)2•12H2O]配制成標準鐵儲備液，并加入硫酸防止鐵鹽水解，使易于保存。

　　② 鐵鹽的最適檢測濃度范圍：目視比色時以50ml溶液中含有10-50μgFe3+為宜，所顯色澤梯度明顯。

　　③ 應在鹽酸酸性條件下進行：加入鹽酸可防止Fe3+水解，并避免弱酸鹽如醋酸鹽、磷酸鹽、砷酸鹽等的干擾

　　④ 入過硫酸胺的目的：為了氧化Fe2+為Fe3+，同時可防止由于光照使硫氰酸鐵還原或分解褪色。

　　2 Fe2++(NH4)2S2O8 →2 Fe3++(NH4)2SO4+SO42-

　　⑤ 為了提高靈敏度或供試管與對照管色調不一致時，可用正丁醇或異戊醇提取后，分取醇層比色。例：枸櫞酸鈉中鐵鹽的檢查

　　⑥ 硫氰酸銨過量：增加配位離子的穩定性，提高反應靈敏度，還能消除Cl-、PO43-、SO42-、枸櫞酸跟離子等與鐵鹽形成配位化合物而引起的干擾。

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