毛細管電泳法
毛細管電泳法(capillaryelectrophoresis,CE)系指以彈性石英毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅動力,依據供試品中各組分的淌度(單位電場強度下的遷移速度)和(或)分配行為的差異而實現各組分分離的一種分析方法。
在平板電泳技術中,使用高電場強度會使電泳介質發熱,即產生焦耳熱。焦耳熱會引起電泳分離介質的溫度梯度、黏度梯度以及速度梯度,從而引起區帶展寬、分離效能降低。在毛細管電泳法中,由于毛細管具有很高的表面積一體積比,有利于熱量從管壁擴散,可有效地克服焦耳熱的影響,因而具有很高的柱效。毛細管電泳儀的主要部件包括0~30kV可調穩壓穩流電源,內徑小于1OOμm、長度一般為20~1OOcm的彈性石英毛細管,電泳池,檢測器和進樣裝置等。
毛細管電泳法主要有以下幾種分離模式:
1.毛細管區帶電泳
2.毛細管凝膠電泳
3.毛細管等速電泳
4.毛細管等電聚焦電泳
5.膠束電動毛細管色譜
6.毛細管電色譜
薄層色譜法的應用
(一)在鑒別試驗中的應用
1.與對照品比較RF值將同濃度的供試品溶液與對照品溶液,在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視,供試品溶液所顯示主斑點的位置(RF)應與對照溶液的主斑點一致,而且兩主斑點的大小與顏色(或熒光)的深淺也應大致相同;或采用供試品溶液與對照品溶液等體積混合后,點樣、展開與檢視,應顯示單一、緊密的斑點。
2.與結構相似的物質比較RF值選用與供試品化學結構相似的藥物對照品與供試品的T1C主斑點比較,兩者的RF應不同,或將上述兩種溶液等體積混合,應顯示兩個清晰分離的斑點。
(二)在雜質檢查中的應用
1.雜質對照法
2.自身稀釋對照法
3.其他方法除上述兩種方法外,也可將雜質對照法與供試品溶液自身稀釋對照法并用。即特定雜質限度采用雜質對照品法,其他雜質限度采用供試品溶液自身稀釋對照法控制。通常應規定雜質的斑點數和單一雜質量,當采用系列自身稀釋對照溶液時,也可規定估計的雜質總量。
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