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　　第五章 分光光度法

　　第一節 可見紫外分光光度法

　　掌握可見--紫外分光光度法的基本原理和測定方法。掌握可見紫外分光光度法在藥物鑒別、檢查和含量測定中的應用。熟悉儀器的校正和檢定方法;紫外吸收光譜與物質結構的關系。了解紫外分光光度計的基本結構。

　　一、基本原理

　　波長200～400nm范圍稱為紫外光區，400～760nm稱為可見光區。物質吸收紫外和可見光區電磁波而產生的吸收光譜稱為紫外-可見吸收光譜。

　　1.光源：紫外光區通常采用氫燈或氘燈，可見光區采用鎢燈。

　　2.吸收池：玻璃池適用于370nm以上的可見光區，石英池適用于紫外、可見光區，通常僅在紫外光區使用。

　　三、紫外吸收光譜與物質結構的關系：紫外可見吸收光譜屬分子吸收光譜，是由分子的外層價電子躍遷產生的，也稱電子光譜。它與原子光譜的窄吸收帶不同。每種電子能級的躍遷會伴隨若干振動和轉動能級的躍遷，使分子光譜呈現比原子光譜復雜得多的寬帶吸收。

　　當分子吸收紫外可見區的輻射后，產生價電子躍遷。這種躍遷有三種形式：

　　(1)形成單鍵的σ電子躍遷。(2)形成雙鍵的π電子躍遷。 (3)未成鍵的n電子躍遷。

　　通常，未成鍵的孤對電子較易激發，成鍵電子中π電子較相應的σ電子具有較高的能量，反鍵電子則相反。故簡單分子中n→π* 躍遷需能量最小，吸收帶出現在長波方向;n→σ*及n→π* 躍遷的吸收帶出現在較短波段;σ→σ*躍遷吸收帶則出現在遠紫外區。

　　例題：物質分子吸收紫外光后，電子躍遷的類型為：A. n→σ* B. n→π* C. π→π* D. σ→σ* E .σ→π* 答案ABCD

　　四、吸收度的測定方法

　　1.對溶劑的要求：能充分溶解樣品，與樣品無相互作用，揮發性小，在測定波長處的吸收要符合要求。

　　2.空白對照實驗：將配制溶液用溶劑(空白溶液)裝入參比池里，調節儀器，使吸收度為0，去除溶劑和容器吸收、光散射。反射的影響。

　　3.測定波長確證：為提高測定方法靈敏度，減少測定誤差，吸收度一般在λmax處測定。

　　4.供試品溶液濃度：使吸收度在0.3～0.7范圍內。

　　5.儀器的狹縫寬度：以減少狹縫寬度時，供試品溶液吸收度不再增加為準。

　　五、應用

　　1.鑒別：(1)對比吸收光譜特征參數：核對供試品溶液λmax、 、A是否符合規定。可同時用幾個峰位作為鑒別依據

　　(2)比較吸收度比值的一致性：吸收峰較多時，規定幾個波長處吸收度比值作為鑒定標準

　　(3)對比吸收光譜一致性

　　2.雜質檢查

　　藥物在紫外-可見光區有明顯吸收，而雜質吸收弱;或雜質有明顯吸收而藥物無吸收，可通過控制吸收度限度來控制雜質量。

　　3.含量測定

　　(1)對照品比較法：供試品溶液和對照品溶液濃度及測定條件應盡可能一致

　　(2)吸收系數法：需對儀器進行嚴格校正和檢定

　　(3)計算分光光度法：通過數學處理消除樣品中干擾組分的干擾

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