點擊查看：2015年公衛執業醫師綜合筆試復習筆記匯總

HLA分型技術

　　HLA分型并不只是一種應用性的臨床檢測指標，免疫遺傳學研究的發展，很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學及細胞學分型技術主要側重于分析HLA產物特異性;80年代起建立的DNA分型方法則側重于基因的分型。

　　一、血清學分型技術

　　(一)HLA-Ⅰ類抗原的檢測

　　HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細胞毒試驗(microlymphocytotoxicitytest)或稱補體依賴的細胞毒試驗(complement dependent cytotoxicitytest)。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細胞，作用后加入免補體，充分作用后加入染料，在倒置顯微鏡下判斷結果，著染的細胞為死亡細胞，表示待檢淋巴細胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。標準抗原清取自多次經產婦或計劃免疫志愿者。

　　(二)HLA-DR、DQ抗原檢測

　　該二抗原分型方法同HLA-Ⅰ類抗原，但所用抗血清須經過血小板吸收以去除針對Ⅰ類抗原的抗體。另外，待測細胞須是經純化的B細胞。

　　血清學分型是一項古老的技術，雖然近年來已建立許多新的分型技術，但血清學方法目前仍是HLA分型的基礎。

　　二、細胞學分型技術

　　HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過純合分型細胞(homozygote typing cell,HTC)及預致敏淋巴細胞試驗(primed lymphocyte test,PLT)檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細胞在識別非已HLA抗原決定簇后發生的增殖反應。由于分型細胞來源困難以及操作手續繁瑣，細胞學分型技術下正逐漸淘汰。

　　三、HLA的DNA分型技術

　　上述傳統的HLA分型方法有許多不足之處，近年來國內外已將HLA分型技術由抗原水平發展到基因水平。

　　(一)限制性片段長度多態性檢測技術

　　這是首先建立的對多態性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內切酶識位置及酶切位點數目的不同，從而產生數量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交，即可分析限制性長度片段多態性(restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)。一定的內切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統方法測定的HLA特異性型別相關。80年代末發展起來的PCR(polymerase chain reaction)技術已被用于RFLP分析，即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段，然后再進行分析，從而大提高了靈敏度。

　　(二)PCR/SSO技術

　　此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針，與待檢細胞經PCR擴增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術可將HLA復合體上指定基因片段特異性地擴增5～6個數量級;而專門設計的SSO(序列特異的寡核苷酸sequencedpecific oligonucleotide)探針又能探測出等位基因間1～2個核苷酸的差異，故PCR/SSO技術具有靈敏度、特異性強、需樣本量少等優點。

　　(三)PCR/SSP技術

　　目前常規的HLA-DNA分型技術，包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等，最終均需用標記的特性探針與擴增產物進行雜交，再分析結果。PCR/SSP方法用乃設計出一整套等位基因組特異性引物(sequence specific primer,SSP)，借助PCR技術獲得HLA型別特異的擴增產物，可通過電泳直接分析帶型決定HLA型別，從而大大簡化了實驗步驟。

　　由于傳統方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大，故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外，目前已建立的HLA基因分型技術還包括PCR單鏈構像多態性分析(PCR-single strand conformational polymorphism，PCR-SSCP)和PCR 異源二聚體電泳多態即PCR指紋圖(PCr fingerprinting)分析。DNA分型技術的應用，使HLA型別分析達到了更精細的水平，并因此發現了更多的HLA多態性。HLA的DNA分型技術現已成為血清學方法的競爭者，并可能在不久的將來完全取而代之。

　　HLA是目前所知人體最復雜的遺傳多態性系統。HLA研究涉及免疫學、生物學、遺傳學、分子生物學、醫學等多個學科，并已發展成為一個獨立的學科分支。迄今HLA研究已達到相當深入的水平，并在諸多方面取得顯著進展，包括HLA復合體結構;HLA分子結構及其表達的調控;HLA分子功能，尤其是在抗原處理、呈遞及T細胞識別中的作用;HLA的DNA分型及多態性研究;HLA與疾病的關系;HLA與移植的關系等。HLA研究不僅使器官移植成為一種極有價值的治療手段，并給基礎與臨床免疫帶來了突破性進展。已經證實，HLA復合體中存在控制免疫應答的基因以及HLA參與約束免疫細胞間相互作用，這表示HLA涉及生命活動的各個水平與多個方面�？梢灶A期，對HLA的研究將繼續成為免疫遺傳學最活躍的部分;對HLA的應用將擴展到基礎、臨床、預防醫學的各個領域。

關注"566執業醫師考試"微信，第一時間獲取試題、最新資訊、內部資料信息!

執業醫師題庫【手機題庫下載】 | 微信搜索"566執業醫師考試"

　　相關推薦：

　　2015年公衛執業醫師考試仿真試題及答案匯總

　　考試吧：10招助你輕松備考2015年執業醫師考試

　　備考2015年執業醫師過程中 如何復習效果更好？