文章責編:wangyuchun00
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限制性片段長度多態性檢測技術
這是首先建立的對多態性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別,后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內切酶識位置及酶切位點數目的不同,從而產生數量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交,即可分析限制性長度片段多態性。一定的內切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統方法測定的HLA特異性型別相關。80年代末發展起來的PCR技術已被用于RFLP分析,即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段,然后再進行分析,從而大提高了靈敏度。
HLA-Ⅰ類抗原的檢測
HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細胞毒試驗或稱補體依賴的細胞毒試驗。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細胞,作用后加入免補體,充分作用后加入染料,在倒置顯微鏡下判斷結果,著染的細胞為死亡細胞,表示待檢淋巴細胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。標準抗原清取自多次經產婦或計劃免疫志愿者。
細胞學分型技術
HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過純合分型細胞及預致敏淋巴細胞試驗檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細胞在識別非已HLA抗原決定簇后發生的增殖反應。由于分型細胞來源困難以及操作手續繁瑣,細胞學分型技術下正逐漸淘汰。
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