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第十八章 免疫學檢測技術

　　免疫學檢測即是根據抗原、抗體反應的原理，利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導生物機體的免疫應答，在生物體內產生特異性和非特異性T細胞的克隆擴增，并分泌特異性的免疫球蛋白(抗體)。由于抗體-抗原的結合具有特異性和專一性的特點，這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白(抗原或抗體)。免疫學檢測技術的用途非常廣泛，它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發病機制的研究。

　　最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質中進行擴散，通過觀察抗原-抗體相遇時產生的沉淀反應，檢測抗原或抗體，最終達到診斷的目的。這種擴散可以是蛋白的自然擴散，例如環狀沉淀試驗、單向免疫擴散試驗、雙向免疫擴散實驗。單向免疫擴散試驗就是在凝膠中混入抗體，制成含有抗體的凝膠板，而將抗原加入凝膠板預先打好的小孔內，讓抗原從小孔向四周的凝膠自然擴散，當一定濃度的抗原和凝膠中的抗體相遇時便能形成免疫復合物，出現以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正比。

　　利用蛋白在不同酸堿度下帶不同電荷的特性，可以利用人為的電場將抗原、抗體擴散，例如免疫電泳試驗和雙向免疫電泳。免疫電泳首先將抗原加入凝膠中電泳，將抗原各成分依次分散開。然后沿電泳方向平行挖一直線形槽，于槽內加入含有針對各種抗原的混合抗體，讓各抗原成分與相應抗體進行自然擴散，形成沉淀線。然后利用標準的抗原-抗體沉淀線進行抗原蛋白(或抗體)的鑒別。

　　上述的方法都是利用肉眼觀察抗原-抗體反應產生的沉淀，因此靈敏度有很大的局限。比濁法引入沉淀檢測產生的免疫比濁法就是利用濁度計測量液體中抗原-抗體反應產生的濁度，根據標準曲線來計算抗原(或抗體)的含量。該方法不但大大提高了檢測的靈敏度，且可對抗原、抗體進行定量的檢測。

　　免疫印跡法則首先通過電泳分離標準的已知抗原，然后將電泳分離的蛋白質轉移到硝酸纖維膜上，浸于待測血清中。如果血清中含有與一種或幾種抗原相對應的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復合物沉淀。在洗去未結合的抗原和抗體后，在膜上加標記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復合物發生反應，最后加入顯色底物(可以是普通顯色劑，化學發光劑或放射性同位素等)進行顯色。由于利用了第二種抗體進行了信號放大，并且可以利用高靈敏的顯色方式，靈敏度也得到了很大的提高。目前該方法已經利用凝集反應檢測抗原-抗體反應也是較傳統的手段之一。利用帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆�？乖c相應抗體結合形成凝集團塊，通過凝集現象，就可以達到檢測的目的。無論是直接凝集法還是間接凝集法都可對抗原或抗體進行檢測。還可以利用二抗對信號進行放大，從而提高檢測的靈敏度。

　　利用補體介導的反應(例如溶血反應)，檢測抗原-抗體反應也是過去常用的方法。抗體與細胞表面抗原相遇，形成紅細胞-抗體復合物即可使加入反應中的補體活化，導致細胞的溶解，此方法可用于紅細胞的各種抗原或相應抗體的檢測，此外利用補體反應的競爭效應，也可對抗原-抗體反應進行定量的檢測利用帶有標記(熒光素、同位素、膠體金或酶)的抗體(抗原)檢測抗原-抗體反應是目前應用最廣泛、最靈敏的方法，使用放射性同位素標記法可使檢測的靈敏度達到pg 級。由于帶標記的抗體能準確而可靠地反映出抗原的位置和數量，且利用二抗可對信號進行放大，因此該方法可用于抗原定性、定量或定位檢測。

　　以下是幾種常用的免疫學技術：

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