第二節 滅菌方法與無菌操作

　　一、F與F0值的概念及其在滅菌中的意義與應用。

　　D值：為在一定溫度條件下被滅菌物品中微生物數降低90%所需的時間。

　　Z值：為降低一個logD值所需升高的溫度數。單位為度，也可以看成滅菌時間減少到1/10所需升高的溫度值。

　　F值：在一系列溫度下給定Z值所產生的滅菌效力與在參比溫度T0下給定Z值所產生的滅菌效力相同時所相當的滅菌時間(min)。常用于干熱滅菌。

　　F0值：Z為10℃時，一定滅菌溫度產生的滅菌效果與121℃ 產生的滅菌效力相同時所相當的時間(min)。也就是將被滅菌物品不同受熱溫度折算到與濕熱121℃滅菌時熱效力相當的滅菌時間。稱為標準滅菌時間。僅應用于熱壓滅菌。

　　《GMP》規定F0值≥8min。實際應在控制在12min。

　　二、常用的滅菌方法

　　(一)物理滅菌法：利用蛋白質或核酸具有遇熱和對射線不穩定的特性，采用加熱、輻射和過濾的方法，殺滅或除去微生物的技術。

　　1、干熱滅菌法：指利用火焰或干熱空氣達到殺滅微生物或消除熱原物質的方法。

　　干熱滅菌法：高溫干熱空氣，穿透力差。適用于耐高溫但不宜濕熱滅菌的物品。如:玻璃器皿、纖維制品、金屬材質的容器、固體藥品、液體石蠟等。

　　藥典規定：一般為160～170℃,120min以上;170～180℃，60min;熱原用250℃45min也可滅除。

　　2、濕熱滅菌法：指利用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽殺滅微生物的方法(比熱大，穿透力強，廣泛應用)

　　(1)熱壓滅菌：用壓力大于常壓的飽和水蒸氣、過熱水噴淋等方法殺滅微生物的方法。滅菌能力強，是熱力滅菌中最有效、應用最廣的滅菌方法。此法適用于耐熱藥物、手術器械、培養基、無菌衣、膠塞等的滅菌。能殺滅所有的細菌繁殖體和芽胞。公認的最可靠方法。

　　藥典規定：126℃×15min、121℃×30min或116℃×40min;標準滅菌時間F0≥8min

　　使用注意事項：使用前檢查壓力表、溫度計、安全閥、排氣口等。避免事故。

　　使用時先開啟放氣活門，將滅菌器內冷空氣排盡。

　　先預熱，再升壓和升溫，達到預定壓力和溫度后開始計時。

　　物品擺放不能太擠，以免妨礙蒸氣流通。滅菌完畢后，壓力降至0后開放氣閥，排盡蒸汽，溫度40℃以下后再開起門蓋。不能驟然減壓。

　　(2)流通蒸汽滅菌和煮沸滅菌：常壓下使用流通蒸氣或沸水滅菌。一般100℃,30-60min。可殺滅繁殖型細菌，但不一定殺滅芽孢。適用不耐高熱品種的輔助滅菌手段。

　　(3)低溫間歇滅菌：60℃-80℃加熱一小時，以殺死細菌繁殖體，室溫保溫24小時，再同法操作2-3次，直至全部芽胞殺滅。適用于必須采用加熱滅菌，但又不耐較高溫度的制劑。

　　3、濾過除菌：G6或0.22μm微孔濾膜濾除細菌。適用于熱敏性藥物尤其是生化制劑。應在無菌環境下過濾操作。

　　4、紫外線滅菌：紫外線及其產生的微量臭氧所起的滅菌作用。254nm的紫外線最強。穿透力差，所以用于表面和空氣滅菌。

　　5、Co60-輻射滅菌：利用Co60-γ射線殺菌的方法。滅菌物品溫度變化小穿透力強。適用于熱敏性藥物，尤其是已包裝藥品的滅菌，但某些藥品經輻射滅菌后可能引起化學成分及生物活性的變化。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy(千格瑞)

　　6、微波滅菌：頻率在300MHz到300kMHz之間的電磁波。靠熱力滅菌，適用水性藥液的滅菌，對含少量水分的藥材飲片及固體制劑也有滅菌作用。

　　(二)化學滅菌法：用化學藥品殺滅微生物的方法。低濃度抑菌，高濃度殺菌。

　　1、消毒劑消毒：殺死病原微生物的方法。常用物體表面滅菌。

　　0.1%-0.2%新潔爾滅溶液;3%-5%的煤酚皂溶液;75%乙醇等

　　2、化學氣體滅菌法：指利用化學藥品的氣體或產生的蒸汽殺滅微生物的方法。

　　環氧乙烷滅菌：環氧乙烷分子易穿透塑料、粉末等固體物質，可用于不耐熱的散劑等固體藥料及其他固體器具的滅菌。含氯物品及能吸附環氧乙烷的物品不宜采用本法滅菌。

　　氣態過氧化氫、甲醛、臭氧等通過加熱產生蒸汽進行空氣環境滅菌。

　　三、無菌操作法

　　1.無菌操作法：必須在無菌控制條件下進行的一種操作方法。

　　2.適用：不能用其他方法滅菌的無菌制劑。多為注射劑、滴眼劑等。

　　3.在無菌操作室或無菌操作柜內進行。

　　4.操作要點與注意事項為：

　　①嚴密控制操作環境的潔凈度;

　　②相關設備、包裝容器、塞子等應采用適當的方法滅菌，并防止再次污染;

　　③操作過程的無菌保證應通過培養基無菌灌裝模擬試驗驗證;

　　④嚴密監控操作環境的無菌空氣質量、操作人員素質、各物品的無菌性;

　　⑤無菌操作工藝應定期進行驗證。

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