1.標準氧化還原電位的數值表示氧化還原能力的大小，標準氧化還原電位負值越大，其還原性越強，容易被氧化;標準氧化還原電位正值越大，其氧化性越強，容易被還原。因此呼吸鏈中各種組分的排列順序應當由低電位依次向高電位排列。

　　2.還原程度來確定。Chance和Williams使用分光光度法測定離體的線粒體在有氧條件下三羧酸循環反應達到平衡時，呼吸鏈中各種傳遞體的還原程度。反應達到平衡時從底物一側到氧一側的各種傳遞體的還原程度應當是遞減的，底物的一側最高，氧一側最低，如下表中數據所示。

　　表6-1　有氧動態平衡時電子傳遞體的還原程度

　　FP：黃素蛋白

　　這種情況好象物理學上的聯通管，圖6?A中，若進水量等于出水量，即流量達到平衡時，離進水口最近的水管中水位最高，離出水管最近的水管中水位最低，從進水管到出水管水位逐漸減低，若把水流視為電子流，就是上述實驗中的情況。

　　3.使用特異的抑制劑　特異的抑制劑能阻斷呼吸鏈中的特定環節，阻斷部位的底物一側的各種傳遞體應為還原型，阻斷部位的氧一側的各種傳遞體應為氧化型，正象我們阻斷聯通管的底部一樣，阻斷部位以前的各水管中水是滿的，而阻斷部位以后的各水管中水均流光。

　　A.不加抑制劑　B.加入抗霉A阻斷

　　復合物Ⅰ：催化NADH氧化、CoQ還原。

　　復合物Ⅱ：催化琥珀酸氧化、CoQ還原

　　復合物Ⅲ：催化Co QH2氧化、Cyt c還原

　　復合物Ⅳ：催化Cyt c氧化、O2還原

　　表6-2　使用抗霉素A前后各種遞電子體的還原型百分數

　　從表中可以看出，FP、Cyt b位于抗霉素A阻斷部位之前，Cytc、cl、aa3位于阻斷部位之后。用不同的抑制劑作此實驗，就可以確定呼吸鏈中各種傳遞體的排列順序。

　　4.在體外實驗中，將線粒體分成各種復合物，檢測其各自催化的反應，再將其重組，檢測其催化能力。

　　美國格林(Green)等實驗室成功地將呼吸鏈分離成具有催化活性的四種復合物以及CoQ和Cytc.檢測各個復合物的功能發現：

　　可以看出CoQ在復合物Ⅰ與Ⅲ，Ⅱ與Ⅲ之間傳遞還原當量，Cyt c在復合物Ⅲ與Ⅳ之間傳遞還原當量。他們又將這四種復合物1：1：1：1的比例混合，加上CoQ和Cyt c重組，基本上恢復了線粒體原有的催化能力。

　　借助上述實驗方法，呼吸鏈各組分的排列順序已基本明確，但仍有些不一致的看法，其中以CoQ至細胞色素C這一部分研究得還很不清楚，對于Fe-S和CoQ的定位和數量也有爭議。