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第二十九單元 黃病毒

　　黃病毒屬(Flavivirus)是一大群具有包膜的單正鏈RNA病毒。這類病毒通常通過吸血的節肢動物(蚊、蟬、白嶺等)傳播，故過去曾歸類為蟲媒病毒(arbovirus)。由于“蟲媒病毒”一詞在分類學中含義不夠準確，所以現在已經不再使用。在我國，主要的黃病毒成員有乙型腦炎病毒、森林腦炎病毒和登革病毒。與黃病毒許多性狀相似，亦通過節股動物傳播，但基因組結構及復制方式不同的甲病毒屬主要分布在美洲和非洲，重要的成員有東部馬腦炎病毒、西部馬腦炎病毒和委內瑞拉馬腦炎病毒。以往認為，我國不存在甲病毒感染。近年研究發現新疆、云南、貴州等地區人群亦有不同程度的甲病毒屬(辛德畢斯病毒、基孔肯雅病毒、東部馬腦炎病毒)感染。

第一節　乙型腦炎病毒

　　流行性乙型腦炎(epidemic encephalitis B)是由嗜神經的乙腦病毒所致的中樞神經系統性傳染病，簡稱乙腦。經蚊等吸血昆蟲傳播，流行于夏秋季，多發生于兒童，臨床上以高熱、意識障礙、驚厥、呼吸衰竭及腦膜刺激征為特征。部分患者留有嚴重后遺癥，重癥患者病死率較高。本病毒首先(1935年)在日本乙腦患者腦組織中分離獲得，因此又稱日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)，所致疾病在日本稱日本乙型腦炎。1940年我國從腦炎死亡病人的腦組織中分離出乙腦病毒，證實本病的存在。除新疆、西藏、青海外，全國各地均有病例發生，年發病人數2.5萬，病死率10%，大約15%的患者留有不同程度的后遺癥。

　　一、生物學性狀

　　(一)形態與結構

　　乙腦病毒屬黃病毒科(Flaviviridae)，呈球形，有包膜的圓形病毒顆粒的直徑約為40nm。核心含單股正鏈RNA，該病毒的完整基因組序列已被測定，全長約11kb，自5′至3′端依次編碼結構蛋白C、M、E以及非結構蛋白NS1～NS5，病毒RNA在細胞漿內直接起mRNA作用，翻譯出結構蛋白和非結構蛋白，在胞漿粗面內質網裝配成熟，出芽釋放。內有衣殼蛋白(C)與核酸構成的核心，外披以含脂質的包膜。在脂蛋白包膜表面有包膜糖蛋白(E)刺突，即病毒血凝素，能凝集雞、鵝、羊等動物紅細胞。抗原性穩定，但近年有報告以具有中和作用的單克隆抗體(McAb)檢測15株國內的乙腦病毒時，可將其分為4個抗原組。人和動物感染本病毒后，均產生補體結合抗體，中和抗體和血凝抑制抗體。包膜內還有內膜蛋白(M)，參與病毒的裝配。

　　(二)培養特征

　　小鼠和乳鼠是最常用的敏感動物，對皮下感染途徑的易感性隨鼠齡的增長而下降的，而腦內接種的易感性影響不大。乳鼠腦內接種乙腦病毒后3～4d發病，出現神經系統興奮性增高、肢體痙攣、麻痹等癥狀，1周左右死亡。感染腦組織內含大量感染性病毒，制成10%懸液-20℃保存，可繼續接種、傳代，是分離病毒、大量制備抗原的可靠方法。

　　BHK-21 (幼倉鼠腎細胞)、白蚊伊蚊細胞(C6/36)、Vero等傳代細胞以及金黃色地鼠腎細胞、豬腎細胞、雞胚成纖維細胞等原代細胞是常用的敏感細胞，病毒在細胞內增殖引起細胞圓縮、顆粒增多、細胞脫落等CPE。在培養上清中含有傳染性病毒，胞漿內胞膜上可檢出特異性抗原。因細胞培養增殖病毒簡便易行，已取代動物培養方法制備疫苗、診斷抗原，以及研究病毒復制機理、篩選抗病毒藥物等。

　　(三)免疫原性

　　乙腦病毒抗原性穩定，在同一地區不同年代分離的毒株之間未發現明顯的抗原變異。E糖蛋白上有中和抗原表位和血凝抗原表位，可誘發機體產生中和抗體和血凝抑制抗體，在感染與免疫中具有重要作用。用單克隆抗體做交叉血凝抑制試驗證實，E糖蛋白上有與黃病毒屬成員廣泛交叉的屬特異性抗原，也有僅與墨里山谷腦炎病毒(Murray Valley encephalitis virus)、西尼羅腦炎病毒(West Nile virus)、圣路易腦炎病毒(St. louis encephalitis virus)交叉的特異性抗原。不同特異性單克隆抗體已用于研究乙腦病毒抗原結構與功能，以及鑒定新分離的毒株，解決了常規免疫血清特異性低的問題。

　　乙腦病毒包膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鵝、鴿和新生雛雞的紅細胞，在pH6.2～6.4條件下凝集效價高。病毒血凝素與紅細胞結合是不可逆的，但這種病毒與紅細胞形成的復合物仍有感染性，加入特異性抗體可抑制這種血凝現象。

　　(四)抵抗力

　　乙腦病毒對熱的抵抗力較弱，56℃30分鐘或100℃2分鐘即可滅活，故應在-70℃條件下保存毒株。若將感染病毒的腦組織加入50%甘油緩沖鹽水中貯存在4℃，其病毒活力可維持數月。乙醚、1：1000去氧膽酸鈉以及常用消毒劑均可滅活病毒。在酸性條件下不穩定，最適酸堿度為pH8.5～9.0。該病毒在外界環境中抵抗力不強。對低溫和干燥的抵抗力很強，冷凍干燥后在4℃冰箱中可保存數年。

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